人套细胞淋巴瘤细胞REC1培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人套细胞淋巴瘤细胞REC1
生长特性：悬浮生长
冻存条件：无血清冻存液
培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S
传代方法：建议首次传代比例为1:2
备注：用无菌离心管收集培养基，以便作过渡对比培养。如对比效果不佳，请直接购买俄罗斯专享会284的完全培养基。

二、细胞处理

细胞收到后请将其培养至良好状态，待灌满完全培养液并封好瓶口以确保细胞运输的安全方式。收到细胞后，使用75%酒精对整个细胞瓶进行喷洒消毒，然后在超净工作台内操作。随后，将细胞瓶放置于37℃、5% CO2培养箱中静置3-4小时，使细胞状态稳定后再进行后续处理。观察细胞生长情况并拍照保存（建议拍摄40x、100x、200x倍的照片各一张），前三天的照片为重要售后依据，未提供照片则视为收到状态良好。传代后，应保留一瓶用原瓶的完全培养基，另一瓶使用自配的完全培养基以供对比。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

1. 当细胞未超过80%汇合度时，收集培养液并放置在37℃、5% CO2的培养箱中，保存5ml完全培养基；
2. 若细胞密度超过80%，进行以下传代步骤：
    1) 丢弃培养上清，用不含钙、镁的PBS清洗细胞1-2次；
    2) 加入约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞状态，若细胞开始变圆并脱落，迅速返回操作台；
    3) 加入不少于5ml的完全培养基以终止消化，轻轻吹打细胞使其完全脱落；
    4) 将悬液转移至15ml离心管中，以1000 RPM离心5分钟，弃去上清，重悬于1-2ml完全培养基中；
    5) 将细胞悬液按1:2的比例分瓶（两个T25瓶），添加新的完全培养基至每瓶5-8ml，然后放入37℃、5% CO2细胞培养箱中继续培养。

b. 细胞冻存

1. 当细胞生长至覆盖培养瓶80%时，弃去培养液并用PBS清洗；
2. 添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞状态，待细胞变圆后加入5ml完全培养基，终止消化，然后轻轻吹打细胞脱落，悬液转移至15ml离心管中，并以1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，加入1ml 雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混匀后加入冻存管；
4. 将冻存细胞直接放入-80℃的冰箱中。如需转入液氮罐，请在-80℃冰箱中存放24小时后再转入。

c. 细胞复苏

1. 从液氮中取出冻存管（注意佩戴防护面具），快速置入37℃水浴中解冻至无结晶，再用75%酒精擦拭管壁；
2. 将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管，1000 RPM离心5分钟；
3. 弃去上清，用5ml完全培养基重悬细胞，并接种至T25培养瓶中，放于37℃、5% CO2培养箱；
4. 次日更换为新鲜完全培养基继续培养。

四、注意事项

在运输过程中，某些贴壁细胞可能会出现脱落现象，这是正常的。如脱落较多，可将培养液收集至离心管，1000 RPM离心5分钟，过渡培养上清，沉淀部分加入1-2ml胰酶轻轻吹打重悬，消化1-2分钟后再加入5ml完全培养基终止反应。接着，重新离心、弃去上清、重悬并按1:2比例分瓶传代（两个T25），并补充新的培养基至5-8ml/瓶。

五、售后条款

1) 细胞问题的重发情况

1. 若细胞在运输途中丢失或瓶身破损，并发生培养液严重漏液，支持重发；
2. 如发生细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果以便核实，核实后将进行重发；
3. 常温发货的细胞静置24小时后，或干冰冻存发货的细胞复苏后24小时内，大多数细胞未存活须提供真实清晰的细胞状态照片，重发；
4. 复苏后24小时内，如干冰发货的细胞或常温发货的细胞在未开封情况下出现污染，将进行重发；
5. 若细胞活性不佳，请在收到产品7天内提供真实实验结果，可使用台盼蓝染色法检测细胞活力，核实后将重发；
6. 在收到细胞后第1、2、3天内拍照以作记录，若三天内未告知问题，则视为产品合格。若收到后4-7天内出现问题，需提供前3天照片及相关操作步骤，交由技术人员判断责任，并根据判断处理。

2) 不予重发的情况

1. 客户造成细胞污染；
2. 错误操作导致细胞状态不佳；
3. 非本库推荐的培养体系导致细胞问题；
4. 未提供细胞培养前3天的照片；
5. 细胞处理时有额外操作；
6. 收到细胞后2天内未告知问题；
7. 具体情况另行评估。

请遵循以上细胞培养指南，以确保您的实验成功。我们建议您使用俄罗斯专享会284的产品，以获得最佳的细胞处理体验。